Détection du VIH-1 résistant aux inhibiteurs de la transcriptase inverse et de la non-nucléoside après l’arrêt du traitement antirétroviral virologiquement suppressif

En utilisant des techniques standard et ultrasensibles, nous avons détecté des mutations de résistance associées aux inhibiteurs de la transcriptase inverse non nucléosidiques chez 11 20% des 54 sujets qui ont arrêté le traitement antirétroviral inhibiteur viral non nucléosidique inhibiteur de la transcriptase inverse. taux d’ARN de type 1 du virus de l’immunodéficience humaine de référence de 51 à 400 copies / mL et de ⩽50 copies / mL, respectivement. Les mutations sont restées détectables pendant au moins 48 semaines chez certaines personnes.

Interruption de la quantification de l’ARN du VIH-1 par l’utilisation du test Roche Amplicor VIH-1 Ultrasensitive Roche Roche Molecular Diagnostics, avec une limite de quantification de 50 copies / mL Au moment du premier rebond virologique à un niveau plasmatique d’ARN VIH-1 & gt 5000 copies / mL après l’interruption du traitement, les échantillons ont été testés pour les mutations pharmacorésistantes Le consentement éclairé a été obtenu de tous les sujets impliqués dans le protocole A5170, et les directives d’expérimentation humaine du Département américain de la Santé et des Services Humains ont été suivies. Applied Biosystems Lorsque des mutations ont été détectées par séquençage de la population, un séquençage répété a été effectué toutes les 4 à 12 semaines jusqu’à la fin de l’étude ou jusqu’à ce que les sujets choisissent de reprendre le traitement antirétroviral. ont été détectés par séquençage de la population au moment du rebond virologique, la PCR allèle-spécifique a été med pour tester les variants mutants de bas niveau Nous avons effectué des tests PCR allèle-spécifiques pour les mutations aux codons 103 et 181 de la transcriptase inverse, comme décrit ailleurs, avec une limite de détection du virus mutant de 01% [3] des mutations des inhibiteurs de la transcriptase inverse non nucléosidiques qui existaient avant l’arrêt du traitement antirétroviral, les cellules mononucléaires du sang périphérique de base ont été testées pour K103N, Y181C et G190A en utilisant le test de ligature des oligonucléotides, selon la méthode détaillée ailleurs [4] La chromatographie a été utilisée pour quantifier les concentrations d’éfavirenz et de névirapine dans le plasma au moment de l’arrêt du traitement par inhibiteur de la transcriptase inverse et toutes les 4 semaines jusqu’à ce que les concentrations atteignent 50 ng / mL pour l’éfavirenz et 200 ng / mL pour la névirapine. les concentrations thérapeutiques d’éfavirenz et de névirapine sont considérées comme étant de 1 à 4 μg / mL et de 3 à 12 μg / mL, respectivement [5, 6] Wilcoxon tests de somme de rang exact ont été utilisés pour comparer le temps à la première détection d’un niveau d’ARN du VIH-1 & gt; 5000 copies / ml entre les sujets avec et sans mutations Analyse de régression logistique avec l’utilisation de l’approche du profil-vraisemblance a été utilisée pour examiner les prédicteurs de mutations de résistance détectées au rebond virologique. Le test exact de Fisher a été utilisé pour vérifier les valeurs P à partir d’analyses univariées Les variables avec P & L provenant d’analyses de régression univariées ont été incluses dans des analyses multivariées. Les analyses statistiques ont été effectuées en utilisant le logiciel statistique SAS, version 91 SASResultats L’âge moyen des 54 sujets de l’étude était de 43 ans; 85% 46 sujets étaient des hommes Le taux moyen d’ARN du VIH-1 avant l’initiation du traitement antirétroviral était de 46 log copies / mL Les sujets avaient reçu un traitement antirétroviral 32 mois en moyenne avant l’arrêt du traitement Trente et un sujets recevaient leur traitement initial; 23 avaient suivi des schémas thérapeutiques antirétroviraux successifs Un sujet prenait de l’éfavirenz avec un inhibiteur de la protéase seul; tous les autres sujets avaient des inhibiteurs nucléosidiques de la transcriptase inverse dans leurs schémas thérapeutiques Quatre sujets supplémentaires comprenaient également un inhibiteur de la protéase 3 recevant de la névirapine et un recevant de l’éfavirenz Parmi les 33 sujets recevant l’éfavirenz au moment de l’arrêt du traitement, 27 avaient des taux plasmatiques thérapeutiques, Parmi les 21 sujets recevant la névirapine, 15 avaient des taux plasmatiques thérapeutiques et 6 avaient des taux subthérapeutiques. Quarante-trois sujets ont arrêté le traitement antirétroviral avec un taux d’ARN du VIH-1 de ⩽50 copies / mL; 11 abandonné avec un taux d’ARN du VIH-1 de 51-400 copies / mLTingt-deux participants 41% ont expérimenté un rebond virologique à un niveau d’ARN VIH-1> 5000 copies / mL 4 semaines après l’arrêt du traitement, 46 participants 85% rebond de 8 semaines, et tous les participants ont connu un rebond virologique de 60 semaines Aucune association n’a été trouvée entre le moment du rebond virologique et la détection des mutations de résistance P = 40, par Wilcoxon test de la somme exacte des rangs associés à la résistance aux inhibiteurs de la transcriptase inverse. 11 20% des 54 sujets au moment du rebond virologique Chez 5 sujets, les mutations ont été détectées par séquençage de population, alors que 6 autres sujets avaient des mutations détectées uniquement par PCR allèle spécifique, survenant à des fréquences bien en dessous de la limite de détection de la population méthode de séquençage Six sujets avaient des mutations détectées par un test de ligature des oligonucléotides avant l’arrêt du traitement antirétroviral, dont 3 h mutations publicitaires détectées au rebond virologique; 1 de ces mutations était à une table de codons différente 1 résume toutes les mutations non nucléosidiques de l’inhibiteur de la transcriptase inverse détectées

une thérapie rovirale avec un taux d’ARN du VIH-1 de 51 à 400 copies / ml présentait des mutations de résistance détectables, contre 6 14% des 43 sujets ayant un taux d’ARN du VIH-1 de 50 copies / mL Cinq 50% des 10 sujets Les antirétroviraux avec des concentrations de médicaments inhibiteurs de la transcriptase inverse non nucléosidiques ont démontré des mutations de résistance détectables, comparativement à 6 14% des 42 sujets ayant des concentrations thérapeutiques non nucléosidiques inhibitrices de la transcriptase inverse.Discussion Dans cette étude, nous avons observé des inhibiteurs non nucléosidiques de la transcriptase inverse. thérapie antirétrovirale lorsque leur taux plasmatique d’ARN VIH-1 est> 400 copies / mL sont en danger substantiel 20% de rebond virologique avec un virus non-nucléosidique résistant aux inhibiteurs de la transcriptase inverse La PCR spécifique aux allèles a détecté plus de mutations de résistance chez ces sujets. également été montré pour détecter plus de résistance aux médicaments VIH-1 transmis, qui a été associée à Des taux plus élevés d’échec virologique [7] Dans notre étude, le risque de résistance était plus élevé chez les patients ayant arrêté le traitement lorsque le taux d’ARN du VIH-1 était compris entre 51 et 400 copies / mL que lorsqu’il était de 50 copies / mL. Réplication intermittente ou de bas niveau soutenue De courtes périodes de charge virale intermittente de bas niveau, ou «blips», se sont révélées non corrélées avec l’échec virologique [8], alors qu’une réplication soutenue à faible niveau pendant le traitement peut entraîner l’évolution Ainsi, une réplication virale de faible niveau peut permettre la sélection de mutants qui restent largement contrôlés pendant une polychimiothérapie continue, mais qui peuvent être détectables parmi les variantes circulantes une fois le traitement interrompu. Ce modèle est compatible avec une étude antérieure. étude de la thérapie intermittente structurée, qui a été interrompue précocement lorsque 3 des 8 patients ayant suivi un traitement contenant de l’éfavirenz ont présenté des mutations de résistance nouvellement apparues [11]. En revanche, d’autres études indiquent que de brèves interruptions de traitement pendant 7 jours ne semblent pas associées à une résistance aux médicaments [12, 13]. De plus, dans notre étude, l’arrêt des inhibiteurs non nucléosidiques de la transcriptase inverse 2 jours avant l’autre Les composants du régime antirétroviral ne protègent pas complètement contre la résistance. Dans l’ensemble, ces observations suggèrent que l’interruption ou l’interruption prolongée des régimes d’inhibiteurs non nucléosidiques de la transcriptase inverse pendant les périodes de faible charge virale devrait être évitée. de virus résistants aux médicaments détectables sélectionnés par interruption thérapeutique Les mutations de résistance aux inhibiteurs non nucléosidiques de la transcriptase inverse se sont révélées persistantes dans le plasma pendant des années, comme indiqué dans la prévention de la transmission de la mère à l’enfant [14], échec de la thérapie contenant un inhibiteur de la transcriptase inverse non nucléosidique [3], Interruption du traitement structuré guidée par CD4 [16] Lorsque la résistance des inhibiteurs non nucléosidiques de la transcriptase inverse a été détectée par séquençage de la population au rebond virologique, la mutation K103N a pu être détectée chez la plupart des sujets sans traitement antirétroviral. Le test de génotypage peut être cliniquement utile pendant 1 an ou plus chez les sujets qui ont abandonné l’adhésion à un traitement contenant un inhibiteur de la transcriptase inverse non nucléosidique. Notre étude présentait plusieurs limites. Premièrement, nous n’avions pas d’échantillons plasmatiques d’ARN VIH-1 avant le début du traitement antirétroviral. et n’excluent pas la possibilité que des mutations aient précédé le traitement. Cependant, la suppression virologique soutenue de ces individus qui adhèrent aux régimes non nucléosidiques inhibiteurs de la transcriptase inverse plaide contre cette possibilité. Deuxièmement, la PCR spécifique des allèles détectait seulement les mutations préspécifiées aux positions 103, 181 et 190 ; Troisièmement, les analyses pharmacocinétiques détaillées des inhibiteurs non nucléosidiques de la transcriptase inverse ont été limitées par la disponibilité des échantillons à partir du moment de l’arrêt du traitement et 4 semaines plus tard, date à laquelle tous les sujets avaient une transcriptase inverse non nucléosidique indétectable. concentrations d’inhibiteurs L’analyse des données sur 23 sujets ayant repris le traitement pendant l’observation était limitée par un petit nombre et la nature hétérogène des schémas thérapeutiques ultérieurs D’autres études sont justifiées dans ce domaine important Enfin, les sujets de cette étude présentaient un nombre élevé de lymphocytes T CD4 et une maladie asymptomatique Des précautions doivent être prises lors de la généralisation de nos résultats à différentes populations. Ces résultats soulignent l’importance de développer des stratégies qui minimisent la résistance lors des interruptions planifiées de la thérapie antirétrovirale contenant des inhibiteurs de la transcriptase inverse non nucléosidiques Pour des interruptions imprévues, le génotypage peut être utile. o guider la thérapie ultérieure

Remerciements

Nous apprécions les contributions de Nina Ellis, qui a effectué le test de ligature des oligonucléotides, et Ronald Bosch, qui a fourni un soutien statistique et un soutien financier supplémentaires. Groupe de recherche clinique sur le sida chez les adultes ACTG financé par l’Institut national des allergies et des maladies infectieuses , AI068634 [Subvention de centre d’analyse de données et de statistiques], AI68634, AI27663, AI46736, AI25915, AI27666, AI27670, AI25897, AI27757, AI38858, AI50410, AI50410, AI25868, AI46386, AI27665, AI27664, AI46339, AI46381, AI34853, AI32783, AI27660. , AI46370, AI 32782, AI27673, AI25903, AI27658, AI27661, AI39156 et AI25859, Unités du Centre de recherche clinique générale financées par le Centre national de recherche en ressources RR00044, RR00046, RR00047, RR00095 et RR00096, Bristol-Myers-Squibb, GlaxoSmithKline , Gilead Sciences, Boehringer Ingelheim, Tanox et TibotecPotential conflits d’intérêts CBH est membre du bureau des conférenciers de Bristol-Myers-Squibb DS est un membre de la Le bureau de Bristol-Myers-Squibb, GlaxoSmithKline et Gilead Sciences DMM est membre du bureau des conférenciers de Bristol-Myers-Squibb et Boehringer Ingelheim DWH a été consultant auprès de Boehringer Ingelheim Tous les autres auteurs: aucun conflit